Аутогемотерапия

Этот вопрос представляется очень важным, т.к. озон имеет низкий терапевтический индекс, а нам нужно добиться как можно более эффективной стимуляции иммунитета при минимально возможной клеточной токсичности. В последние годы возможные токсические эффекты озона интенсивно изучались, а именно посредством измерения индуцированного озоном гемолиза, показатель которого никогда не превышал 3,5% (Bocci et al. 1993a, b), возможного образования метгемоглобина (не был обнаружен ни в одном случае), морфологического разрушения (ниже 80 мкг озона/мл крови электронно-микроскопическим способом не обнаружено); содержание липид-гидропероксидов в плазме после озонирования концентрацией 90 мкг озона/мл крови увеличилось в три раза, но очень быстро вернулось к исходным показателям, уровень внутриэритроцитарного GSH (восстановленный глютатион) никогда не понижался более, чем на 10% и быстро дегенерировался (Bocci et al. 1993b).

Неожиданно, по сравнению с обычно применяемыми при аутогемотерапии концентрациями озона от 5 до 40 мкг озона/мл крови, нам пришлось значительно повысить концентрации озона, чтобы улучшить производство цитокинов, при этом самые эффективные концентрации озона без токсичных побочных эффектов оказались в диапазоне между 50 и 80 мкг/мл крови, в зависимости от индивидуального содержания антиоксидантов в плазме.

Концепцию (Bocci 1992, Bocci et al. 1993a, b) корреляции производства цитокинов посредством иммункомпетентных клеток в крови с концентрацией озона можно рассматривать как существенный прогресс.

Кроме того, удалось показать (Bocci et al. 1993a), что физиологический уровень Ca2+ в плазме улучшает индукцию цитокинов, прежнего производителя Ca2+ -комплекса (CPD = цитрат-фосфат-декстроза) мы заменили Ca-гепарином и дополнительно добавили до 5 mM CaCl2 (рис. 4).

Рис.4: Возможный механизм индукции посредством озона и степень активации за счет увеличения Ca2+.

Как озон реагирует на клеточном уровне, остается пока неопределенным, схема на рис. 5 является попыткой дать представление о данном процессе. Возможно, озон определенным образом окисляет некоторые углеводы (галактоза?) в лектинах на клеточной мембране, что в последствии может привести к связанности с трансдуктивными протеинами. Кроме того, производные озона, как то H2O2 и гидропероксиды жирных кислот, могут диффундировать через клеточную мембрану и активировать цитоплазматический ген-регуляционный фактор NF-k B, который выполняет различные функции в иммунной системе и способствует активации генов для различных цитокинов (Schreck et al. 1991, Lenardo u. Siebenlist 1994). Я хотел бы еще раз обратить Ваше внимание на важность выбора правильной дозы, в том смысле, что очень низкие концентрации озона малоэффективны, в то время как очень высокие могут индуцировать окислительный стресс и возможно апоптоз клеток (Buttke u. Sandstrom 1994).

Решающим является тот факт, что конкретный объем крови обрабатывается определенным количеством озона в определенной концентрации в течение определенного времени, чтобы получить достоверную, стохиометрическую реакцию. При выполнении аутогемотерапии рекомендуется забрать 250-300 мл аутокрови в трансфузионную емкость и добавить 25 ед./мл Ca-гепарина/мл крови и 5 mM Ca2+. Этот момент следует особо подчеркнуть, т.к. при вирусных заболеваниях необходимо обязательно активировать клеточный иммунный ответ, чтобы окончательно остановить процесс развития болезни или хотя бы замедлить его.

Рис.5: Схематичный обзор индукции цитокинов посредством озона в мононуклеарных клетках крови.

Озонокислородная смесь вводится в кровь посредством шприца очень просто и быстро, содержащая такое количество озона, чтобы достичь окончательной концентрации 70 мкг/мл крови, при этом возникает небольшое избыточное давление, т.к. в имеющиеся в продаже трансфузионные емкости объемом 450 мл поступает 300 мл крови на 240 мл озонокислородной смеси.

Концентрация озона ниже 40 мкг/мл крови недостаточно эффективна относительно индукции цитокинов, наш более ранний опыт показал, что концентрации озона в зависимости от содержания антиоксидантов в плазме в диапазоне от 50 до 80 мкг/мл крови дают надежные результаты; мы используем в настоящее время концентрацию озона 70 мкг озона/мл крови.

Непосредственно после подачи газа кровь осторожно перемешивается в течение 5 минут. Если каждую минуту измерять парциальное давление кислорода, а также pCO2 и показатель pH, то максимальная величина pO2 достигается в течение 3-5 минут. Тот факт, что озон вступил в химическую реакцию в крови, позволяет отказаться от дальнейшего перемешивания раствора и реинфундировать кровь в течение последующих 20-30 минут, при этом, по возможности, можно продолжать перемешивать, чтобы избежать сендиментации эритроцитов. Скорость реинфузии контролируется, как обычно при трансфузии крови. Способ проведения процедуры исключительно прост, не требуется никакой техники, так что этот метод можно использовать и в скромно оснащенных больницах в странах третьего мира.

Частота проведения процедур может быть различной, но рекомендуется следующая программа: три раза в неделю в течение первых двух недель и два раза в неделю в течение последующих четырех недель. Даже если за это время озоном было обработано 17 л крови, то это соответствует лишь 7% лимфоцитов (Westermann u. Pabst 1992). В дальнейшем, лечение можно проводить один раз в неделю или каждую вторую неделю, без ограничений во времени.

Метод аутогемотерапии не имеет побочных эффектов. Если сравнить токсичность таких потентных средств, как эндотоксин для индукции цитокинов, то аутогемотерапия благодаря отсутствующей токсичности (Bocci 1994a) способна индуцировать высвобождение цитокинов практически физиологическим способом, а именно в различных клеточных областях после переселения реинфундированных клеток (Bocci 1988). Схема на рис. 3 иллюстрирует циркуляцию активированных иммунных клеток, без значительного повышения уровня цитокинов в сосудах, и это основная причина токсичности при использовании фармацевтических препаратов. В таблице 5 сделана попытка подробно представить все «за» и «против» экзогенно вводимых цитокинов по сравнению с аутогемотерапией озоном. Чтобы обеспечить стабильный уровень антиоксидантов в плазме и нормальное поступление витаминов, одновременно мы назначаем ежедневный прием мультивитаминов (включая витамины С и Е).

Что касается пациентов с повышенной чувствительностью к гепарину, с пониженным содержанием антикоагулянтов или ацетилсалицилкислоты, с геморрагическим синдромом или тромбоцитопенией, то следует принять правильное решение, стоит ли этим пациентам назначать озонотерапию. В одном из таких случаев можно использовать обычную цитрат-фосфат-декстрозу (CPD) и медленно реинфундировать кровь. Если доступ к вене затруднен, прямое введение озона (внутримышечно, подкожно) могло бы стать альтернативой, но мне не хотелось бы высказываться о степени эффективности в данном случае, пока я не располагаю убедительными клиническими результатами.

Дополнительная информация: